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Intercambio Iónico
El método más utilizado en la purificación de proteínas y otras moléculas que presenten carga eléctrica es la Cromatografía de Intercambio Iónico (IEC).
Las claves del poder de esta técnica se hallan en su elevada capacidad, gran poder de resolución y a su facilidad de escalado desde el nivel analítico al preparativo. Se calcula que aproximadamente el 70% de los protocolos de análisis y purificación de proteínas incluyen un paso en el que aparece la Cromatografía de Intercambio Iónico.
El mecanismo operativo de la IEC se basa en el ligado reversible de las moléculas cargadas sobre la superficie del soporte cromatográfico.
La fuerza con la que se produce este ligado está gobernada por la fuerza de la carga del sustrato, el pKa de la matriz de intercambio iónico y por las propiedades del eluyente acuoso: pH y fuerza iónica.
La gama de rellenos TSK para intercambio iónico incluye cuatro tipos de intercambiadores: aniónicos fuertes, aniónicos débiles, catiónicos fuertes y catiónicos débiles. La selección del intercambiador adecuado permitirá distinguir entre las específicas propiedades de ionización (pI) de cada proteína e incluso diferenciar proteínas con el mismo pI a través de sus diferentes cargas localizadas.
Toso ofrece una línea completa de rellenos de sílice y poliméricos para intercambio iónico, IEC, diseñados para una amplia variedad de aplicaciones: alta capacidad, alta resolución, alta velocidad, etc.
Columnas base sílice
Las columnas TSK-gel DEAE-2SW basadas en una micropartícula de sílice son ideales para la resolución de biopolímeros de bajo peso molecular (péptidos, nucleótidos, oligómeros).
Las columnas TSK-gel DEAE-3SW y TSK-gel CM-3SW, también en base sílice, por su mayor tamaño de poro son recomendables para el análisis de biomoléculas de peso molecular medio (polipéptidos, enzimas, etc.)
Columnas poliméricas
Las columnas poliméricas TSK-gel DEAE-5PW, Q-5PW y SP-5PW, basadas en una matriz de polimetacrilato de 1000 Å de tamaño de poro son la solución perfecta para la resolución de grandes biopolímeros (proteínas, ácidos nucleicos, etc).
Son especialmente recomendables cuando se trata de analizar biopolímeros en fluidos biológicos, ya que su extremada resistencia a valores extremos de pH (2-12) permite lavar la columna con soluciones alcalinas (0.1N NaOH).
Las nuevas columnas BIOASSIST se componen de un relleno de metacrilato de aprox 4000 Å de poro y funcionalizado con una estructura reticular de grupos poliamina.
La capacidad de estas columnas se ha demostrado independiente del tamaño de la proteína y garantiza también una máxima velocidad de transferencia, además de una mínima pérdida de adsorción.
Ligado y elución de proteinas en resinas intercambiadoras aniónicas TSK-gel y Toyopearl
Resinas no porosas (NPR)
El desarrollo de pequeñas partículas no porosas ha permitido reducir espectacularmente los tiempos de análisis en las separaciones de HPLC.
Con estos rellenos no porosos el factor limitante de la velocidad de difusión en el interior de los poros se ha eliminado, con lo que es posible
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Intercambio Iónico
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