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Interacción Hidrofóbica (HIC)



Interacción hidrofóbica (HIC)
La técnica de Interacción Hidrofóbica (HIC) separa las proteínas en base a su hidrofobicidad superficial, y se caracteriza por la adsorción de las biomoléculas a la superficie débilmente hidrofóbica de la resina en una solución fuertemente salina y su posterior elución mediante una gradiente salino negativo.
Dicho gradiente suele iniciarse con una solución de 2-4M de Sulfato Amónico, Sulfato Sódico, etc., disminuyendo gradualmente la concentración hasta niveles de 0.1-1.0M.
A pesar de que el mecanismo de separación es similar al de la fase reversa, su selectividad es diferente, con lo que ambas técnicas pueden ser consideradas como complementarias.
La principal ventaja de la HIC frente a la fase reversa está en las condiciones no-desnaturalizantes de la HIC, ya que el contrario de la fase reversa no requiere de modificador orgánico para la elución de las diferentes proteínas.
Como regla general, todas las proteínas que pueden ser fraccionadas mediante la precipitación con sulfato amónico, pueden ser separadas por esta técnica.
Las resinas poliméricas de TosoHaas son química y físicamente estables. Son resistentes a los ataques microbianos, son perfectamente estables frente a los valores extremos de pH y a los cambios de fuerza iónica y son compatibles con una amplia variedad de disolventes orgánicos.
Además las resinas TosoHaas pueden ser esterilizadas por autoclavado y lavadas con 0.5M de NaOH. 

TSK-gel Phenyl-5PW
Las TSKgel Phenyl-5PW fueron las primeras columnas poliméricas para HIC del mercado y sus características y prestaciones contribuyeron decisivamente a popularizar esta técnica.

TSK-gel Ether-5PW
Las columnas TSKgel Ether-5PW son menos hidrofóbicas que las de tipo Phenyl, dando lugar a un ligado más débil y a unos tiempos de retención más cortos. Se recomienda su empleo en el caso de proteínas de elevada hidrofobicidad.

Estabilidad química de la columna TSKgel Phenyl-5PW frente a los ácidos y bases
Separacion de suero humano en columnas de HIC
Comparacion de columnas de HIC convencionales y no porosas
Efecto del tratamiento básico sobre los tiempos de retención
Recuperación de la actividad enzimática en la columna TSKgel Phenyl - 5PW
Retain large RNAs on porous TSK-GEL HIC column

TSK-gel Butyl-NPR

Estructura de las resinas TSK-GEL Butyl NPR

Al igual que en otras técnicas cromatográficas, la reducción de partícula hasta 2.5 μm aporta a la tecnica un extraordinario aumento de eficacia. A la vez, la ausencia de poros del relleno elimina el problema de la velocidad de difusión, que obliga en muchos casos a trabajar con velocidades reducidas para no perjudicar a la resolución de la separación. Con el relleno TSKgel Butyl-NPR, TosoHaas presenta una columna especialmente indicada para el análisis rápido de muestras con la técnica de HIC.
Los tiempos de análisis típicos que se consiguen con esta columna son de 15 minutos, extraordinariamente cortos si los comparamos con los de las columnas convencionales.






Interacción Hidrofóbica (HIC)

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