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Test NIST: caracterización de la fase



La nueva columna mediterranea seal8 ha sido sometida al test SRM870. Este test, diseñado por el NATIONAL INSTITUTE OF STANDARDS & TECHNOLOGY y recientemente evaluado por el comité de expertos de la USP (United States Pharmacopeia) es considerado actualmente como el más recomendado para la evaluación de las propiedades más significativas de una columna de fase reversa. El elevado número de rellenos de fase reversa de HPLC que existen en el mercado y las importantes diferencias en su comportamiento cromatográfico han llevado a la necesidad de diseñar un método de caracterización y clasificación de estos rellenos.
Este procedimiento utiliza una mezcla de cinco componentes orgánicos (uracilo, tolueno, etilbenceno, quinizarina y amitriptilina) los cuales se cromatografían siguiendo unas condiciones de fase móvil, flujo, y temperatura exactamente controladas.


El análisis detallado de los diferentes picos obtenidos permitirá evaluar de una manera objetiva y lo que es más importante, estandarizada, el comportamiento del relleno cromatográfico y por lo tanto prever su idoneidad en el trabajo analitico normal.
Uracil
Este compuesto se usa comúnmente como indicador del volumen muerto de la columna (pico no retenido).
Toluene/Ethylbenzene
El factor de selectividad entre estos dos compuestos puede ser usado para caracterizar las diferencias entre rellenos debidas primariamente a interacciones solvofóbicas.
El valor de retención absoluta de estos compuestos da idea de la capacidad de retención de la columna (columns strenght) y además ambos compuestos pueden utilizarse para medir la calidad del empaquetado a través del número de platos teóricos.
Quinizarin (1,4-dihydroanthraquinone)
Es un compuesto quelante y su comportamiento en una columna de fase reversa es un claro indicador de la presencia o ausencia de cationes metálicos accesibles en la superficie del relleno. Una baja actividad de la columna mostrará picos simétricos mientras que cuanta más elevada sea la actividad más aumentará la cola del pico de la quinizarina, pudiendo llegar incluso a desaparecer.
Normalmente eluirá entre los picos del etilbenceo y de la amitriptilina; cuando el relleno contiene grupos polares “embedded”, este pico se retrasará pudiendo salir incluso después de la amitriptilina.
En la columna mediterranea seal8, el pico de la Quinizarina es perfectamente simétrico, lo cual indica un nivel extraordinariamente bajo de trazas metálicas.
En la gráfica puede verse el resultado obtenido en comparación con el que presentan otros rellenos del mercado, según datos obtenidos en nuestro laboratorio o bien publicados por el NIST.
Indudablemente el relleno de la columna mediterranea seal8 se pone en cabeza en cuanto a pureza de la sílice empleada.
Una sílica ultrapura es una garantía de reproducibilidad y de ausencia de mecanismos secundarios (y no controlados) de interacción.

Amitriptyline
Este antidepresivo de carácter básico (pKa=9,4) es un excelente indicador del nivel de actividad de los silanoles residuales. Una columna bien desactivada mostrará un pico simétrico, mientras que rellenos con poca desactivación darán lugar a picos con marcadas colas, pudiendo incluso no aparecer en el cromatograma.
La importancia de que una columna pueda superar este test se hace evidente si pensamos en la cantidad de compuestos que presenta un marcado carácter básico, especialmente en el campo de la química farmacéutica. De hecho, garantiza que desaparecerán casi por completo los problemas de colas o incluso de desaparición de picos, tan habituales en el día a día del laboratorio y que obligaban a diseñar complejos sistemas de fase móvil. Con esta columna un simple ajuste de pH servirá para eluir las sustancias más complejas.
La comparación del resultado de la columna mediterranea seal8 con el publicado para otros rellenos del mercado muestra un nivel de desactivación no conseguido hasta ahora. Esta desactivación es el resultado del proceso MED (Multifuntional Endcapped Deactivation), el cual es además totalmente reproducible gracias a las cualidades de pureza de la sílica de partida, estrictamente controladas y reproducibles lote a lote.








Test NIST: caracterización de la fase